1. PCR原理
PCR是一种能够在短时间内实现将单个DNA分子扩增数百万倍的生化过程。其扩增过程包括三个连续步骤：变性， 退火， 延伸。
2. 设计引物需要考虑的参数
引物是决定PCR反应成败的最重要因素之一。
引物设计主要考虑因素为：特异性和扩增效率。
a.特异性是由错配的频率决定。特异性差的引物易产生不需要的扩增产物。
b.扩增效率是指引物以每循环增加两倍扩增产物的最优能力。
3. 计算引物的Tm值
引物用Tm值来评价DNA-DNA杂交链稳定性，过高的退火温度会导致引物-模板杂交不足，导致PCR产物产率低，而退火温度过低可能导致非特异性产物扩增。
不超过20个碱基的引物Tm值计算使用如下Wallace法则：Tm = 2℃ (A+T) + 4℃ (G+C)
超过20个碱基的引物Tm值计算可使用引物设计软件，比如Primer3。
4. 引物使用原则
PCR反应使用的引物纯化：
标准脱盐引物能满足大多数PCR应用。
PCR反应使用的引物浓度：
每种引物的PCR反应最终浓度应在0.1至0.5 μM之间。
注：过高的引物浓度会增加错配的可能，这可能导致非特异性扩增。过低的引物浓度则可能导致扩增效率低。
简并性引物对PCR扩增的影响：
通常一条引物中简并的碱基不要超过4处。
注：简并的碱基数过多，则会造成反应体系中有效引物相对的较少，应适当增加引物的使用量。但引物量过大，容易引起非特异扩增。
常用的引物设计软件推荐：primer6，beacon designer8.14，NCBI等，前两个是需要下载软件的，具体版本根据自己电脑情况选择，NCBI是网站在线使用，做生命科学实验的人一定不陌生这个网站。
BD8.14
Primer6
NCBI
如电器使用过程中出现问题给您带来不便，我们深表歉意，麻烦您拨打公司客服热线（400-883-8253），我们将安排工作人员为您提供上门维修服务，感谢您的来电！ 服务区域；全市各区及周边等辖区均有维修网点，统一报修,就近安排维修上门服务一、能工巧匠：为您提供优质服务《工程师背景
TAOTAO防盗门的全国售后服务电话是400-883-8253。拨打此电话，您可以预约售后服务，之后售后服务网点会根据您所在的地区进行就近安排，并与您联系，以安排上门维修。虽然不同地区的具体售后电话号码可能不同，但售后服务流程是一致的。如何进行TAOTAO防盗门的售后维修？1. 您可以拨
国祥空调售后维修客服热线{400-883-8253} 国祥空调是一款实用的家用产品，能够有效的保护我们的财富和贵重物品。随着时间的推移，即使是国祥空调也会遇到一些故障和问题。国祥空调服务热线24小时故障报修全天候保修热线】就是一个可以为您解决所有问题的地方。 服务区域范围：
OLIMPIA空调作为家庭中重要的安全设备之一，其专业服务质量直接关系到用户的使用体验和资产安全。OLIMPIA空调24小时售后服务热线：400-883-8253在购买OLIMPIA空调后，了解其专业服务电话大全及维修网点查询信息至关重要。本文将为您介绍OLIMPIA空调客服专业服务热线电话及维
众杰燃气灶作为家用设备的领先品牌，始终致力于为用户提供高品质的产品和专业的售后服务。无论您遇到任何问题，都可以拨打众杰燃气灶售后服务电话：400-883-8253，我们的专业团队将为您提供及时、高效的解决方案。众杰燃气灶售后号码多少实时反馈全+境+到+达日常使用故障及处理方法在使用申电金
卡萨帝热水器的售后维修电话是：400-883-8253。卡萨帝热水器作为智能家居市场的佼佼者，以其先进的技术和优质的产品赢得了广大消费者的青睐。再优质的产品也难免会在使用过程中出现一些问题，因此售后服务的质量就显得尤为重要。为了保障用户的使用体验，卡萨帝热水器提供了专业的售后维修服务，其中一个重要的
今日推荐
2025-05-01
2025-05-01
2025-05-01
2025-05-01
2025-05-01
2025-05-01
萨蒙路易保险柜全国服务号码-全国400服务号码实时反馈-今-日-汇-总
TAOTAO防盗门24小时售后服务维修点号码实时反馈-今-日-更-新
国祥空调全国售后维修号码-全国各区网点服务号码实时反馈-今-日-资-讯
OLIMPIA空调售后号码-全国400服务号码实时反馈-今-日-更-新
众杰燃气灶售后号码多少实时反馈全+境+到+达
卡萨帝热水器售后号码-全国400服务号码实时反馈全+境+到+达
